Инструментальное осеменение маток (ИОМ)

[teplov]

Спасибо за доверие! Все верно ,именно такое у меня сложилось впечатление(которое лиш подтверждает мнение давно описанное в литературе по И.О.) но это если есть необходимость получить матку по качеству олодотворения близкую к е.о. то-есть такую что может полноценно откладывать яйца не один сезон(например мне в качестве покупателя хотелось бы получить именно такую). А если же нужны матки для проверки по потомству или других селекционных целей то достаточно 1-3 трутней в зависимости от поставленной задачи, но мне подсказывают что сперму от одного трутня лучше разбавить и довести обьем до 8 мкл .

Еще раз тебе спасибо за (достаточно 1) а уже 2-3 лишнее пока, так как 1 матка родит 2 генетически разных трутня и не имеет значения сколько трутней ты взял от нее, 2-4 или сто. Так что мне скорей всего тоже понадобиться разбавитьль этим летом. Брониславович задал мне задачу. У тебя была мысль, кипяченная вода, соль, глюкоза. Когда прочитал (не в этом форуме) вспомнил Кривчикова, у него кипяченная вода и соль с аптеки. Обязательно попробую этим летом, потому что сперма трутней довольно живучая. Я писал об физ растворе с аптеки.

[maxdmi]

у него кипяченная вода и соль с аптеки.

?

физ растворе с аптеки.

?

teplov, Это одно и тоже ,под одним названием хлорид натрия, или физраствор

[teplov]

teplov, Это одно и тоже ,под одним названием хлорид натрия, или физраствор

Возможно, но вода кипьяченная из чайника имеет ph-8.0 такой как нам нужно. А на банке с физ раствора пишет вода для инъекций. У Кривчикова в фильме о и.о вода из чайника, значит так надо, он для меня авторитет. В химии я не разбираюсь, и толком не знаю что такое ph. Пишу с надеждой что кто то растолкует мне и всем кого это интересует. Можно попробовать раствор Ритнера его готовят в аптеке я узнавал, Рутнер пишет что подходит.

[Пахомич]

Робавляти сперму,яку і що це дає? Щоб осіменяти 2 рази потрібно вміти гарантовано осіменяти 1 раз. Хотіти не вредно.Вернимось до такого питання ,де сагайдачний-шовкопляс ?

Я так понял что если взять сперму 1го трутня то она в неразбавленном виде грубо говоря просто "розмажется по стенкам" а так создется иллюзия полноты семяприемника и матка быстрее начнет яйцекладку.Конечно это всего лиш мое предположение, советы исходят от более опытных инсеминаторов Что касается двукратной инсеминации поскольку я убедился что доза 4 мкл дает в результате нормально сеющую матку то в случае неудачной попытки повторного введения можно оставить и так, получится просто повторный наркоз. Я пока всего несколько раз пробовал вводить сперму повторно, и проблем это не вызвало. Чаще было наоборот одну и ту же матку неудавалоясь инсеминировать ни в первый ни во второй раз (сперма выходила наружу несмотря на манипуляции с капилляром)Я таких маток отпускал на свободное спаривание но они почему то пропадали.

Думаю що наступила пора вернутись до київского семінару. З вищесказаного можна пурийти до висновку,що на цьому семінарі курсанти не здобули належних теоретичних і практичних знань,щоб самостійно розпочати роботу (крім виготовлення капіляра ). Як я і говорив цей захід був використаний групою або однією особою для реклами. Впевнено можна стверджувати.що цей захід приніс більше негативу ніж користі.Де ви були до семінару на такому рівні і зараз.

[krotokot@ukr.net]

teplov, Это одно и тоже ,под одним названием хлорид натрия, или физраствор

Возможно, но вода кипьяченная из чайника имеет ph-8.0 такой как нам нужно. А на банке с физ раствора пишет вода для инъекций. У Кривчикова в фильме о и.о вода из чайника, значит так надо, он для меня авторитет. В химии я не разбираюсь, и толком не знаю что такое ph. Пишу с надеждой что кто то растолкует мне и всем кого это интересует. Можно попробовать раствор Ритнера его готовят в аптеке я узнавал, Рутнер пишет что подходит.

Правой рукой оттягивают поршень шприца, чтобы набрать в капилляр немного воздуха для разделения физиологического раствора (0,9%-ный NaCl)физиологический раствор соли (=9 грамм соли на литр дестилированной воды). и спермы.Затем трутня, совершившего эякуляцию, подносят левой рукой к капилляру и поверхностью спермы касаются его кончика. Трутня слегка оттягивают от капилляра, сохраняя контакт между капелькой спермы и капилляром, что создает условия втягивания в капилляр чистой спермы, так как мукус более вязкий и не втягивается, как сперма. Следует избегать засасывания мукуса, так как он быстро свертывается и образует пробку, что остановит дальнейшее прохождение спермы. Если же мукус попал в капилляр, то необходимо подать поршень назад и освободить проход, и после этого возобновить засасывание спермы. Когда подносят следующего трутня, из капилляра опускают капельку спермы предыдущего, чтобы она соединилась с новой порцией и, оттянув немного трутня, засасывают ее вновь. Для осеменения одной правильно подготовленной матки необходимо отобрать порцию спермы в объеме 8 микролитров (обычно не менее чем от 10 трутней). При этом современное оборудование позволяет набрать в капилляр 4-6 таких порций. Порции воздушными пузырьками не разделяют (как в случае с отделением первой порции от физраствора). При этом объем спермы, при ее введении в половые пути матки, измеряют специальными метками на капилляре. Если в ближайшие 3-5 мин после наполнения капилляра спермой осеменение маток не планируется, чтобы избежать образования пробки, в конец капилляра втягивают капельку физиологического раствора и отводят шприц в сторону. После осеменения пяти маток капилляр промывают от остатков спермы и дезинфицируют 96%-ным спиртом с добавлением 0,1%-ного йода. Крючки и пинцеты дезинфицируют после осеменения каждой матки.

[maxdmi]

А на банке с физ раствора пишет вода для инъекций

?

правильно пишется , это и есть изотонический раствор 0,9%, есть ещё гипертонический физраствор, где процент соли составляет от 1% и выше до 10%

в фильме о и.о вода из чайника,

?

Вода необходимо дистиллированная......потому как , что бы получилась нормальная концентрация , а именно 0,9% необходимо учитывать плотность воды , плотность воды не постоянная и разнится с изменением температуры. для полоскания горла,или промывки носа можно набрать воду и из чайника ,а в чайник из лужи .

Можно попробовать раствор Ритнера его готовят в аптеке я узнавал,

?

teplov, В вашем сообщении необходимо слово можно ,заменить на нужно

но вода кипьяченная из чайника имеет ph-8.0

?

teplov, Не может такого быть !!!,Молекула воды состоит из двух атомов водорода и одного — кислорода, которые соединены между собой ковалентной связью и т д ,это из школьного курса химии , и кто учился во времена совдепии должны хорошо помнить , тем кто во времена развала конечно простительно , в головах тоже произошёл развал . Вернёмся к воде из чайника ,потому как вода из чайника является чистой водой и её Ph всегда равен 7,0, а вот морская вода имеет 8,0 teplov, так какая вода вам нужна??

[Пахомич]

[ Когда подносят следующего трутня, из капилляра опускают капельку спермы предыдущего, чтобы она соединилась с новой порцией и, оттянув немного трутня, засасывают ее вновь. Для осеменения одной правильно подготовленной матки необходимо отобрать порцию спермы в объеме 8 микролитров (обычно не менее чем от 10 трутней). При этом современное оборудование позволяет набрать в капилляр 4-6 таких порций. Порции воздушными пузырьками не разделяют (как в случае с отделением первой порции от физраствора). При этом объем спермы, при ее введении в половые пути матки, измеряют специальными метками на капилляре. Если в ближайшие 3-5 мин после наполнения капилляра спермой осеменение маток не планируется, чтобы избежать образования пробки, в конец капилляра втягивают капельку физиологического раствора и отводят шприц в сторону. После осеменения пяти маток капилляр промывают от остатков спермы и дезинфицируют 96%-ным спиртом с добавлением 0,1%-ного йода. Крючки и пинцеты дезинфицируют после осеменения каждой матки. Процес відбору сперми може впливати на якість апліднення маток і на їх агибель? Якщо впливає,то яким чином?

[krotokot@ukr.net]

[ Когда подносят следующего трутня, из капилляра опускают капельку спермы предыдущего, чтобы она соединилась с новой порцией и, оттянув немного трутня, засасывают ее вновь. Для осеменения одной правильно подготовленной матки необходимо отобрать порцию спермы в объеме 8 микролитров (обычно не менее чем от 10 трутней). При этом современное оборудование позволяет набрать в капилляр 4-6 таких порций. Порции воздушными пузырьками не разделяют (как в случае с отделением первой порции от физраствора). При этом объем спермы, при ее введении в половые пути матки, измеряют специальными метками на капилляре. Если в ближайшие 3-5 мин после наполнения капилляра спермой осеменение маток не планируется, чтобы избежать образования пробки, в конец капилляра втягивают капельку физиологического раствора и отводят шприц в сторону. После осеменения пяти маток капилляр промывают от остатков спермы и дезинфицируют 96%-ным спиртом с добавлением 0,1%-ного йода. Крючки и пинцеты дезинфицируют после осеменения каждой матки. Процес відбору сперми може впливати на якість апліднення маток і на їх агибель? Якщо впливає,то яким чином?

Физраствор применяют не для смешивания со спермой а как буферно-пограничную зону между спермой и окружающей средой.Сначала в капиляр набирают физраствор потом воздух потом сперму для консервации на 5-10минут перед самим процессом оплодотворени убирают физраствор с капиляра нажатием и сьемом жидкости с кончика посредством стирильной палочки

[Пахомич]

Физраствор применяют не для смешивания со спермой а как буферно-пограничную зону между спермой и окружающей средой.Сначала в капиляр набирают физраствор потом воздух потом сперму для консервации на 5-10минут перед самим процессом оплодотворени убирают физраствор с капиляра нажатием и сьемом жидкости с кончика посредством стирильной палочки

?

Стояло питання, як впливає відбирання сперми на якість запліднення маток і їх виживання після запліднення.

[krotokot@ukr.net]

Физраствор применяют не для смешивания со спермой а как буферно-пограничную зону между спермой и окружающей средой.Сначала в капиляр набирают физраствор потом воздух потом сперму для консервации на 5-10минут перед самим процессом оплодотворени убирают физраствор с капиляра нажатием и сьемом жидкости с кончика посредством стирильной палочки

?

Стояло питання, як впливає відбирання сперми на якість запліднення маток і їх виживання після запліднення.

Зависит сначала от трутня потом от пчеловода-лаборанта

[Пахомич]

Зависит сначала от трутня потом от пчеловода-лаборанта

?

Поконкретіше в якій ступені від трутня.Тутень виховувався в сильній здоровій сімї при достатньому поступленні вуглеводного і білкового кормів. Вроді повинен мати здоровля.

[maxdmi]

Физраствор применяют не для смешивания со спермой

?

сагайдачный-шовкопляс, применяют и для этого

для смешивания со спермой

?

потом центрофугой проводят смешивание , и отслоение , и для

как буферно-пограничную зону между спермой и окружающей средой

?

[krotokot@ukr.net]

Физраствор применяют не для смешивания со спермой

?

сагайдачный-шовкопляс, применяют и для этого

для смешивания со спермой

?

потом центрофугой проводят смешивание , и отслоение , и для

как буферно-пограничную зону между спермой и окружающей средой

?

Использование разбавленной,разбавленной-центрифугированной спермы.Нативная сперма имеет существенные недостатки:• Использование в одной дозе спермы 6-8-10 трутней.• Кластерности спермы в сперматеке(и впоследующемпроизводство распода с использованием ограниченногочисла комбинаций)• Резкое возрастание возможности негативного эффектаблизкородственного скрещивания и снижения витальностисемьи( жизнеспособности.)• Сперма последнего трутня оказывается первой и имеетбольшие преимущества для попадания в сперматеку. Использованиецентрифугированной спермы• Использование спермы в среднем от 60 -80трутней.• Растворы—Трис буфер( модификации). Физиологическийраствор.( для пчел!!!!).• Недопустимо использование Киев буфера!!!! Так как егоиспользование ведет к вымыванию поверхностныхводорастворимых белков и резкому снижениюфертильности спермы!!!• Недопустимо использование животноводческих ( свиных)разбавителей-активаторов так как большинство из них неявляется стерильным а нагрев до 90 градусов разрушаетбольшинство из них. Техника приготовленияцентрифугированной спермы.• Стандартный набор спермы в капилляр( капилляры)• Набрать раствор разбавителя в мини колбочку( объ?м колбочки должен быть в 20 разбольше объ?ма спермы) .выдавить туда сперму из капилляра. Соотношение спермы ираствора должно быть 1:10.• Перемешать сперму с раствором или тонкой проволочкой( спицей) или пастеровскойпипеткой.( набирая и отпуская жидкость—начинать с поверхности). Перемешиваниелюбым способом не менее 2 минут. осторожно и без фанатизма)• Поместить пробирку с раствором спермы в центрифугу и центрифугировать 2 минуты неменее 1000 оборотов ( в настоящее время рекомендуют использование более мощныхцентрифуг для уменьшения остаточного количества растворителя в сперме.)• Сразу после центрифугирования весь растворитель должен быть удален!!!!Через пятнадцать мнут если не удалить разбавитель---сперма практически нефертильна!!!!!• Использовать полученную сперму для инсеминации сразу. К длительному хранению такаясперма непригодна. Разбавленнаянецентрифугированная сперма• Набор спермы стандартен.• Растворы—рекомендовано применение киев буфера.( модифицированные растворы)• Перемешивание одного объ?ма спермы и одного обьма буфера.• Перемешивание механически вручную( спицей)• С помощью специальных устройств( мини миксеры( на крайне малых оборотах-10-15оборотов в минуту.)• С помощью специальных устройств( winkler) итд.• Такие препараты спермы подлежат хранению и допустимо длительное хранение.• Преимущество перед нативной—резко возрастает процент очистки спермопроводящихпутей после инсеминации. Возможно использование большего количества вариантовспермы трутней при формировании одной дозы. Хранение спермы• При комнатной температуре….???????• недопустимо попадание прямого солнечного света.• Губительно на сперму не сама температура а ее колебания.• При хранении спермы в холодильнике в диапазоне температур от 12-15 градусов фертильность практически не меняется в течении 8недель. В нашей практике мы храним сперму- 4-6 недели.• Использование замороженной спермы. Пока на стадии эксперимента.Устойчивых результатов не получено.( профессор Бенефельд)• В любом случае должно быт обеспечено условие стерильности!!!!!!! Это цитата

[Пахомич]

сагайдачный-шовкопляс

?

Все,що ви говорите це все в далекому майбутьньому -воно може бути ,а може і не бути. Щоб це відбулося на професійному рівні потрібно вміти осіменити матку на рівні любительському з гарантією,що матка не загине після осіменіння і проживе 2-3 роки.

[teplov]

teplov, Не может такого быть !!!,Молекула воды состоит из двух атомов водорода и одного — кислорода, которые соединены между собой ковалентной связью и т д ,это из школьного курса химии , и кто учился во времена совдепии должны хорошо помнить , тем кто во времена развала конечно простительно , в головах тоже произошёл развал . Вернёмся к воде из чайника ,потому как вода из чайника является чистой водой и её Ph всегда равен 7,0, а вот морская вода имеет 8,0 teplov, так какая вода вам нужна??

Не знаю, наверное морская вода из чайника. Пока остановлюсь на растворе Ритнера в качестве наполнителя, разбавлять сперму пока планировать не буду.

[Пахомич]

teplov

?

Я думаю що ви вже розібрались з pH розберетесь і з морською водою. В нашій роботі це правильно вибраний напрямок.

[Олег Кихно]

По поводу воды из чайника. Дело в том что вода в каждой местности отличается по составу, чем чище вода тем ближе ее PH к 7.0 если в чайнике много накипи то такая вода будет щелочная(попробуйте засыпать лимонную кислоту увидите реакцию нетрализации щелочи кислотой) Я специально измерял PH получилось по моему 8.2(точно не меньше 8.0) А щелочная среда способствует выживанию сперматозоидов и кстати не только у пчел. Но экспериментально пока не прверял. В литературе часто описывют применение простого физраствора при.И.О. в принципе многие получают неплохой результат у некоторых результат неважный(могу предположить на каком то этапе сперма смешивается с физраствором.) Микалай Халенков на семинаре подсказал как можно выйти из ситуации если нет специального раствора. Нужно перед набором основной порции набрать каплю спермы и отделить ее пузырьком воздуха в таком случае сперма которую вводим не соприкасается с физраствором правда при этом остается капля которой защищаем сперму от высыхания, но об этом ничего сказано не было

[Олег Кихно]

Еще раз тебе спасибо за (достаточно 1) а уже 2-3 лишнее пока, так как 1 матка родит 2 генетически разных трутня и не имеет значения сколько трутней ты взял от нее, 2-4 или сто. Так что мне скорей всего тоже понадобиться разбавитьль этим летом. Брониславович задал мне задачу. У тебя была мысль, кипяченная вода, соль, глюкоза. Когда прочитал (не в этом форуме) вспомнил Кривчикова, у него кипяченная вода и соль с аптеки. Обязательно попробую этим летом, потому что сперма трутней довольно живучая. Я писал об физ растворе с аптеки.

?

Я все таки считаю что 1 трутнем осеменять можно исключительно для експериментальных целей, понятно что потомство от такой матки будет более однородным но что это дает без проверки по потомству в последующих поколениях? Ведь за то время пока будем проверять она уже может затрутоветь. Как займусь растворами постараюсь помочь, надеюсь "Нова Пошта" у вас функцианирует?

[Паланочка]

Нужно перед набором основной порции набрать каплю спермы и отделить ее пузырьком воздуха в таком случае сперма которую вводим не соприкасается с физраствором правда при этом остается капля которой защищаем сперму от высыхания, но об этом ничего сказано не было smile.gif

?

Олег так и с другой сторони так же воздух сперма одного трут воздух физ раствор.

Я все таки считаю что 1 трутнем осеменять можно исключительно для експериментальных целей. Как займусь растворами постараюсь помочь, надеюсь "Нова Пошта" у вас функцианирует?

?

у нас точно фунционирует стоимость возмещу

[teplov]

Я думаю що ви вже розібрались з pH розберетесь і з морською водою. В нашій роботі це правильно вибраний напрямок.

В позапрошлом году когда осеменял первых маток у меня были проблемы с набором спермы, в прынцепи как у всех били у меня мысли что плотность фоз раствора маленькая (раствор был, вода и соль за антибиотики я еще не знал) соли я сыпал от души, выход маток в последних партиях составила 20 процентов. Вода была из чайника, соль поваренная. Если бы тогда сыпал соли 1 процент и добавлял антибиотик результат и тогда может был бы не плохой. А вода у меня жосткая накипи хватает, так что ph скорей всего в норме. 2 Октября после обеда я буду в Киеве, кто будет на Апимондии и не против встретиться телефон в личку.

[Бортник]

А вода у меня жосткая накипи хватает, так что ph скорей всего в норме.

Читаю, читаю я про воду в этой теме и у меня предчувствие что рН с жесткостью не связан. Пример - дистиллят, тут жесткость равна нулю, среда нейтральная, значит рН должен быть 7,0. Но могу ошибаться...

[Rad]

По поводу воды из чайника. Дело в том что вода в каждой местности отличается по составу, чем чище вода тем ближе ее PH к 7.0 если в чайнике много накипи то такая вода будет щелочная(попробуйте засыпать лимонную кислоту увидите реакцию нетрализации щелочи кислотой)

с вашего позволения внесу немного ясности, pH-7 может иметь и очень грязная вода, всё зависит от того как примеси меняют кислотность, но вы правы в том смысле что вода с большим кол-вом накипи это вода с большим кол-вом солей жесткости а соли жесткости это соли кальция и магния которые представлены в том числе карбонатами (гидрокарбонатами), а карбонаты имеют щелочную (основную) природу, другими словами природная вода богатая солями кальция (жесткая) может иметь pH немного больше 7, хотя не обязательно тут главное карбонаты, если кальций в виде хлоридов-сульфатов среда будет нейтральной (7) кстати засыпая лимонную кислоту вы видите не реакцию нейтрализации а реакцию с карбонатами которые выделяют углекислый газ, реакция нейтрализации между кислотой и щелочью глазом не видны

А щелочная среда способствует выживанию сперматозоидов и кстати не только у пчел.

у позвоночных однозначно, о пчелах не знаю не знаком с основами ИОМ и не планирую осваивать но имею хим образование так что если могу быть полезен - к вашим усугам не очень понял предмет ваших разговоров физрастворы (NaCl и рингера) стерильные готовые совершенно доступны дистиллят доступен (даже бидистиллят), сухая смесь для рингера доступна, в принципе отдельные компоненты буферов (фосфатный ацетатный карбонатный пр) доступны и зачем кипяченка неизвестного состава?

[teplov]

rad. Спасибо, коротко и ясно все объяснили.

[Паланочка]

не знаком с основами ИОМ и не планирую осваивать но имею хим образование так что если могу быть полезен - к вашим усугам opr06K93.gif

?

Simple Saline Solution- 100 ml. (простий солевой раствор) 100 ml. distilled water 1.0 g. sodium chloride 0.25 g. dihydrostreptomycin pH 8,7 – 8,9. можете пояснити як його приготувати в домашніх умовах ? як визначити рН Na-Citraat (*2 H2O) -2,43 g NaHCO3 -0,21g KCI -0,04g Sulfanilamid -0,30g Glukose -0,30g H2O -100ml PH-8,4 і цей , поясніть по компонентах ... цікавить і де їх дістати в невеликій кількості зновуж таки РН ваги для відмірування з шкалою у 0,01г маю придбати.

[Rad]

Паланочка, если готовить растворы самому нужно обзавестись необходимым минимумом мерной посуды, чтобы точно отмерять фиксированные объемы воды и р-ров от 100мл до 25мл я рекомендую использовать "колба мерная плоскодонная узкогорлая с кольцевой меткой" поищите в интернете картинки а за одно как правильно использовать, так же полезно иметь несколько мерных пипеток (градуированных), возможно бюретку кстати а чем вы объемы вводимых р-ров отмеряете? шприцами микролитровой градуировки? я ж не знаю как вы уже оснащены чесно говоря мне немного сложно давать в этой области предметные советы тк я не аналитик (хотя если надо проконсультируюсь у коллег), а главное я не знаю какой класс точности и чистоты нужен для ИОМ? и что вам уже рекомендовали? не буду ли я повторяться? например весы до второго знака ИМХО для приготовления растворов аналитической точности грубоваты, мы даже для более простых целей используем те что до третьего, далее какой класс чистоты компонент вам рекомендовали на лекциях? "формакопейный"? "для микробиологии"? в принципе компании реализующие хим компоненты в киеве я знаю но есть всё от чистоты ОСЧ или микробиологии до технической, надо больше данных если по спискам нужна расшифровка опять же пожалуйста, напр Sulfanilamid это обычный стрептоцид приобрести который элементарно хоть кило, но опять же чистота , pH отдельная песня, во первых надо знать какими р-рами рекомендовано проводить коррекцию pH, если таковая предусмотрена, или это проверочные значения которые должны получиться при точном приготовлении? кислотность однозначно нужно мерять pH-метром, я не слежу за новинками на рынке (мне доступны еще советские) но на сколько я знаю сейчас есть портативные приборчики с нормальным классом точности за разумные деньги (опять же знаю кто реализует могу спросить или взять прайслист) прибор необходимо откалибровать по двум точкам обычно этого достаточно, калибровочные растворы как правило в комплекте в общем что смогу подскажу только немного конкретизируйте вопрос а то "приготовление раствора в домашних условиях" общо немного, может там такие требования запредельные что дома и не приготовить, а может плюс-минус километр неважно например неизвестно какие требования по стрерильности тут я вообще слаб, хотя опять же есть контакты даже туда где ГМО определяют всегда можно спросить